产品简介：多种成分均可以从细胞中提取总蛋白，如 Triton、SDS、NP-40 等。NP-40 裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是采用一种温和的裂解方法获得总蛋白的裂解液，所获得的蛋白质可以用于 PAGE 电泳、Western、免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)等，并含有多种蛋白酶抑制剂成分，可有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。

NP-40 Lysis Buffer 主要由 Tris-HCl、NaCl、NP-40 以及sodiumpyropho-sphate、β-glycerophosphate、sodium fluoride、EDTA 等多种蛋白酶抑制剂组成，用NP-40 Lysis Buffer 得到的蛋白，可以用 BCA 蛋白定量试剂盒和 Bradford 蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

操作步骤(仅供参考)：配制含有 PMSF 的 NP-40 Lysis Buffer：取 NP-40 Lysis Buffer 置于室温平衡，加入PMSF，使其终浓度为 1mM，临用前配制，不可长期保存。(一)贴壁培养细胞1、去除贴壁细胞的培养液，用 PBS、NS 或无血清培养液清洗 1 次，低速离心，弃上清，留取沉淀。2、按照6孔板每孔加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例，加入NP-40 Lysis Buffer，移液器轻轻吹打使裂解液和细胞充分接触，置于冰上或 4℃裂解15～30min，通常裂解液作用于细胞 1～3s 内，细胞就会被裂解，通常 6 孔板每孔细胞加入150μl 裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200～250μl，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。3、10000～12000g，4℃离心 5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。4、进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。(二)悬浮培养细胞1、低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。用手指轻弹细胞，使其松散。2、下同贴壁细胞 2～4 操作步骤(三)组织样本1、把组织剪切成细小的碎片，越小越好。2、取在液氮或超低温冰箱中冷冻 30min 以上的组织，迅速用液氮研磨，研磨过程尽量控制在 1～2min 之内，以减少蛋白的降解。3、按照每20mg组织加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液，冰上或4℃裂解 30～60min。亦可以采用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆，直至充分裂解，过程尽量控制在 2～5min 之内，以减少蛋白的降解。4、下同贴壁细胞 3～4 操作步骤。

注意事项：1、在贴壁培养细胞的操作步骤中，去除贴壁细胞的培养液后，如果血清中的蛋白没有干扰，可以不用清洗。2、如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。3、在培养细胞的裂解中，如果细胞量较多，必需分装成 50～100 万细胞/离心管，然后再裂解；大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。4、如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈Vortex使样品裂解充分，然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。5、细胞裂解的操作步骤，应置于冰上或 4℃进行。6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。7、试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。

有效期：12 个月有效。低温运输，按要求保存。