产品简介：目前世界上最常用的蛋白浓度检测方法是：BCA 法和 Bradford 法。BCA 法测蛋白的原理是在碱性环境下蛋白质与 Cu2+络合并将 Cu2+还原成Cu1+。BCA与 Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物,在 562 nm 处有最大的光吸收值并与蛋白质浓度成正比,据此可测定蛋白质浓度。BCA 法与传统方法相比,操作更简单、试剂及其形成的颜色复合物更稳定、灵敏度更高。BCA 法测定蛋白浓度兼容性亦很好,不受大部分样本中其他成分的影响,对于 5%以内的去垢剂如 SDS、Triton X-100、Tween 20、Tween80、NP-40 具有很好的兼容性,但易受螯合剂、还原剂等的影响,在测定蛋白浓度前应尽量使样本满足如下要求：EDTA 浓度≤10mM、DTT 浓度≤1mM、2-ME≤0.01%、无 EGTA。

BCA Protein Assay Kit 在 50～2000μg/ml 浓度范围内有较好的线性关系。本试剂盒适用于微量蛋白质浓度的测定,其最小检出量为 25μg/ml。该试剂盒仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。

自备材料：1、蒸馏水、生理盐水或 PBS2、酶标仪或分光光度计、EP 管、96 孔板或比色皿、恒温箱或水浴锅

操作步骤(仅供参考)：1、取 1ml 蛋白标准配制液加入到含有 20mg 的蛋白标准(BSA)中,充分溶解后配制成20mg/ml 的蛋白标准溶液,配制后可立即使用,配制的蛋白标准溶液应-20℃保存。2、取适量的 20mg/ml 蛋白标准溶液,稀释至终浓度为 500μg/ml,如取25μl 蛋白标准(20mg/ml),加入 975μl 稀释液,充分混匀即配制成 500μg/ml 蛋白标准溶液。注意：待测蛋白溶解于什么样的稀释液中,蛋白标准也宜溶解于同样的溶液中,一般可用0.9%NaCl 或 PBS 作为 BSA 的稀释液,稀释后的 500μg/ml 蛋白标准溶液也应-20℃长期保存。3、根据样品数量,按试剂(A):试剂(B)=50:1 的比例配制 BCA 工作液,即取50 份BCA试剂A和 1 份 BCA 试剂 B,充分混匀,即获得 BCA 工作液(注意：正常 BCA 工作液应为苹果绿或墨绿色,如变为紫色或其他颜色应弃用)；例如取 5ml BCA 试剂 A 和0.1ml BCA试剂B, 配制成 5.1ml BCA 工作液,BCA 工作液室温 24 小时内稳定。4、将 500μg/ml 蛋白标准溶液按 0、1、2、4、8、12、16、20μl 加到96 孔板或EP管中, 加稀释液补足至 20μl,其蛋白标准浓度依次为 0、25、50、100、200、300、400、500μg/ml。5、加 20μl 待测蛋白到 96 孔板或 EP 管中,如果样本不足 20μl,用稀释液补足至20μl。注意：如果标准品稀释液与溶解待测蛋白的溶液不同,应在待测蛋白中加入20μl 稀释液；如果标准品稀释液与溶解待测蛋白的溶液相同,无需在待测蛋白孔中加入20μl稀释液,以减少不同溶液的差异。6、向各孔或 EP 管加入 200μl 配制好的 BCA 工作液,迅速混匀,37℃孵育30～60min。7、冷却至室温,立即用酶标仪或分光光度计测定 562nm 波长处吸光度(如无562nm,540～595nm 之间的波长也可),各孔或 EP 管吸光度减去蛋白浓度为 0μg/ml 的标准管的吸光度,以求得的差值为纵坐标：以标准孔或 EP 管中蛋白浓度(μg/ml)为横坐标,得出标准曲线及回归方程,根据标准曲线计算出待测样品的蛋白浓度。

注意事项：1、蛋白标准(BSA)粉末溶解于蛋白标准配制液后,即获得蛋白标准原液(即20mg/ml的蛋白标准),该原液中含有防腐剂,不影响后续检测,该蛋白标准原液-20℃长期保存。2、待测蛋白溶解于什么样的稀释液中,蛋白标准也宜溶解于同样的溶液中,否者待测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致,有可能导致测定不准确。3、如果检测效果不佳,可以室温放置 2h 或 60℃放置 30min,颜色会随着时间的延长不断加深,显色反应也会随温度升高而加快；如果浓度较低,可以适当延长孵育时间或在较高温度下孵育。4、测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加,吸光度或颜色没有明显变化,可能的原因是样品中含有严重干扰 BCA 法测定蛋白浓度的物质。5、如检测样本中含有较多螯合剂、还原剂等影响因素时可考虑 Bradford 法测定。6、因 BCA 法测定时颜色会随着时间的延长不断加深,建议每次测定时都作标准曲线,且显色反应的速度和温度有关,所以除非精确控制显色反应的时间和温度,否则每次都做标准曲线。7、如果没有酶标仪也可以用普通的分光光度计测定,但应考虑比色皿的最小测定体积,按比例适当加大 BCA 工作液的用量使总体积不小于最小检测体积,样品和标准品的用量亦相应按比例放大；使用分光光度计测定蛋白浓度时,可以测定的样品数量会显著减少。8、为了加快 BCA 法测定蛋白浓度的速度可以适当加热,但切勿过热,否则易失效。9、试剂开封后请尽快使用,以防影响后续实验效果。10、为了加快 BCA 法测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热,但是切勿过热。室温保存。蛋白标准配制成溶液后-20℃冻存。

有效期：12 个月有效。