产品简介：

新霉素(geneticin,G418)  又称遗传霉素，是一种氨基糖苷类抗生素，是最常用的细胞稳 定转染抗性筛选试剂。G418  能阻断蛋白质合成，对细菌、酵母、高等植物以及哺乳动物细 胞均具有氨基糖苷类毒性，用于真核细胞从转座子Tn5 和 Tn601 稳定转染新霉素(neo)抗性 基因的选择和维持，经常用于基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面。

G418    Solution 经过滤除菌， 一般工作浓度为50～1000ug/ml   不等，不同 类型的细胞需要根据实验确定最佳浓度，在具有相对稳定基因组的细胞(如CHO 细胞)中，

一旦筛选出稳定细胞株后，无需加入G418 即可继续培养。该试剂仅用于科研领域，不适用 于临床诊断或其他用途。

产品组成：

操作步骤(仅供参考):

1、 由于每种细胞对G418 的敏感性不同，而且不同批次G418 的活性也不尽相同，所以在筛选之前，需要确定G418 的最佳筛选浓度，一般在50～1000μg/ml 范围内进行筛选。

2、将细胞制备成细胞悬液，并稀释到1000个/ml。

3、加入不同量的G418 Solution  (20mg/ml),选择在10~14天内使细胞全部死亡的最低 G418 浓度来进行下一步的筛选试验。

注意事项：

1、 尽量减少反复冻融的次数，以免失效。

2、基因转染到细胞内后，需要一段时间才能表达出蛋白质，所以筛选不宜太早。

3、筛选也不宜太迟，一般要在转染24h 之后才开始加G418 筛选，因为转染了外源基因的 细胞代谢负荷较大，增值较慢，时间长了就会被没有外源基因转入的细胞所淹没，最终 导致筛选不出阳性克隆。

4、 随着细胞代谢，G418 的浓度和活性都会下降，应每3~5天更换一次含有G418 的筛选 液，这时药物浓度可以降至200μg/ml。

5、加药筛选约5~7天左右，细胞会大量死亡，为了减少死亡细胞对阳性克隆的不利影响

以及增加阳性克隆的获得率，可以应用套环法或刮除法结合有限稀释法来筛选阳性克隆， 加药后在高倍镜下，刮除阴性克隆，消化阳性克隆后继续筛选培养或者用套环套住阳性  克隆，在套环内加胰蛋白酶消化，把消化液吸到另外一个新的孔中培养，最后再用有限  稀释法把阳性克隆在96孔板中筛选。

6、一般经过4周左右的筛选，得到的阳性克隆都比较稳定，但是外源基因如果没有整合到 基因组中的话，目的基因还是很容易丢失的，再次筛选往往是必不可少的，经过2次以 上的筛选之后才能找到遗传稳定的细胞克隆。

7、 注意无菌操作，尽量避免污染。

8、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期： 12个月有效。低温运输， -20℃保存。