Difficult DNA Transfection Reagent(难转细胞 DNA 转染试剂)是一款适用于难转细胞的 DNA 专用转染试剂，可用于质粒 DNA 的高效传送。它具有极强的 DNA 转染能力，与其它转染试剂相比，具有转染效率高、不受血清影响、毒性低、稳定性好、转染简单易行、重复性好等优点。

本产品可适用于众多难转染细胞株的质粒 DNA 转染，适用于多种贴壁细胞系，特别适用于各种难转细胞如 BMDC、4T1、CT26、DC2.4 等，均可得到较高的转染效率。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

产品组成:

自备材料:

1、胰蛋白酶消化液、完全培养液和不完全培养液、PBS

操作步骤(仅供参考):

以 24 孔板为例，进行质粒 DNA 转染。

1、细胞接种:每孔接种 0.5~1.0x10⁵个细胞，细胞培养 12~24 小时，使转染时细胞密度达到 60~70%融合度。

2、稀释质粒 DNA: 将 0.5ug 质粒 DNA 加入 Opti-MEM 培养基中，稀释后的终体积为10uL。

3、稀释转染试剂:取 1uL 的 Difficult DNA Transfection Reagent 加入到 9uL 的OptiMEM 培养基中，稀释后的终体积为 10uL。

4、复合物制备:将上述质粒 DNA 稀释液和转染试剂稀释液混合，轻轻吹打均匀后室温静置 10 分钟。

5、将上述 20uL 复合物加入到 24 孔板中，轻轻吹打混匀，继续培养 18~48 小时后检测转染效率，无需更换培养基。

不同细胞器皿转染时培养液、DNA、转染试剂用量表

注意事项:

1、 注意无菌操作，尽量避免污染。

2、 可通过改变细胞密度、DNA 浓度以及 Difficult DNA Transfection Reagent 浓度对转染进行优化。保证细胞融合度在 60%以上，Difficult DNA Transfection Reagent(uL):DNA(ug)可以在 1:1~5:1 之间调整。为了获得最佳的转染效果，不同的细胞类型和培养条件有所不同，可在上述推荐范围内自行优化转染条件。

3、试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。

4、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期:12 个月有效;室温运输，4℃保存。