| 中文名称 | Lipofectamine 2000 转染试剂 |
|---|---|
| 规格 | 1ml |
| 储存条件 | —20℃,12个月 |
产品说明
Lipofectamine2000是一种新型的阳离子脂质体转染试剂。适合于将核酸(DNA和RNA)转染入真核细胞，具有低细胞毒性；对多种类型的细胞和培养板都具有高转染效率；转染时血清的存在不影响转染效率的优点。
适用范围：贴壁细胞和悬浮细胞（哺乳动物细胞系）的转染。
质粒DNA的转染
对大多数细胞来说，DNA(µg)与Lipofectamine2000 (µl)的比例为1:2~1:3。转染时高的细胞密度可以得到高的转染效率和表达水平，并能减少细胞毒性。
1. 以24孔板为例
贴壁细胞： 转染前一天，用500 µl不含抗生素的培养基接种0.5～2×105细胞，使之第二天能达到70-90%汇合。
悬浮细胞：在准备DNA-Lipofectamine2000复合物之前，用500 µl不含抗生素的培养基接种4～8×105细胞即可。
2. 对每个转染样品，进行以下操作
a. 在Eppendorf管里分别加入50 µl Opti-MEM I Reclipped Serum Medium和0.8 µg DNA轻柔混匀，制成DNA稀释液。
b. 在另一个Eppendorf管里分别加入50µl Opti-MEMI Reclipped Serum Medium和2.0 µl Lipofectamine2000(注意用前先混匀)，轻柔混匀，制 成Lipofectamine2000 稀释液，室温静置5分钟。
c. 将DNA稀释液和Lipofectamine2000稀释液混合，轻柔混匀，室温静置20分钟， 形成DNA-Lipofectamine2000复合物。DNA-Lipofectamine2000复合物在室温下可稳定存在6小时。
3. 将DNA-Lipofectamine2000复合物加入到接种好的细胞中，将培养板轻轻地前后摇动，使复合物分散均匀。
4. 在37℃ CO2培养箱中培养4-6小时后更换培养基,继续培养18～48小时。
5. 如果要筛选稳定细胞株，则在转染24小时后将细胞按照1:10或更高的比例接种到新鲜培养基中，第二天加 入选择性培养基进行筛选。
质粒DNA转染的优化 为达到最高的转染效率和降低细胞毒性的影响，可以对DNA和Lipofectamine2000的比例以及细胞密度进行优化，一 般在1:0.5~1:5的范围内优化DNA (µg)和Lipofectamine2000 (µl) 的比例。
不同细胞培养板中转染时培养基、核酸及Lipofectamine2000用量
|
细胞培养板 |
每孔面积 |
培养基用量 |
DNA转染 |
siRNA |
|||
|
铺板培养基用量 |
稀释培养基用量 |
|
|
|
|
||
|
96-well |
0.3 cm2 |
100 uL |
2 × 25 µl |
0.2 µg |
0.5 µl |
5 pmol |
0.25 µl |
|
24-well |
2 cm2 |
500 uL |
2 × 50 µl |
0.8 µg |
2.0 µl |
20 pmol |
1.0 µl |
|
12-well |
4 cm2 |
1 mL |
2 × 100 µl |
1.6 µg |
4.0 µl |
40 pmol |
2.0 µl |
|
6-well |
10 cm2 |
2 mL |
2 × 250 µl |
4.0 µg |
10 µl |
100 pmol |
5 µl |
|
60-mm |
20 cm2 |
5 mL |
2 × 0.5 ml |
8.0 µg |
20 µl |
200 pmol |
10 µl |
|
10-cm |
60 cm2 |
15 mL |
2 × 1.5 ml |
24 µg |
60 µl |
600 pmol |
30 µl |
细胞转染注意事项： 一定要进行预实验，来摸索最佳条件 ：
Lipofectamine2000转染试剂用于不同细胞转染时用量参考（以96孔板为例）
常见细胞的转染效率（仅供参考，实验条件不同转染效率会有较大差别）
|
细胞种类 |
HEK293 |
293T |
293F |
HCT 116 |
WRL -68 |
HepG2 |
NIH/3T3 |
THP-1 |
Hela |
MCF-7 |
CHO-S |
TS cell |
HO1980 |
A549 |
|
转染效率 |
99% |
99% |
99% |
>80% |
~80% |
~80% |
~80% |
>50% |
>80% |
>80% |
97% |
>60% |
>60% |
>80% |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
细胞种类 |
MEF |
BE(2)C |
CHO |
Chok1 |
Hep3B |
C2C12 |
Neuro-2a |
HUVEC |
MDCK |
Hep2C |
WEHI |
B50 |
Calu1 |
L929 |
|
转染效率 |
>50% |
77% |
96% |
>50% |
>80% |
>80% |
>70% |
>80% |
>80% |
质检证书COA
COA质检报告
注意事项
1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。 相关产品
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